加湿器对病理切片质量的提升作用

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标题

  在常规病理切片的制作过程中,组织蜡块切下的蜡片容易出现干燥、碎裂,严重影响切片质量和制片速度[1].目前尚无统一方法,有采用“湿纸团擦拭蜡面”的方法来湿化蜡片; 也有采用“哈气”的方法,用呼出的水汽来湿化蜡面[2].但是,以上方法影响切片效率、易导致标本污染。所以,临床迫切需要一种既能保证工作效率同时又能提高切片质量的加湿方法。我们通过联合使用超声波加湿器及自制的切片机加湿套装对蜡片进行加湿,期望通过该方法改善制片质量,同时保证工作效率。

  1 材料与方法

  1. 1 材料 搜集 2014-01-2014-05 间北京协和医院病理科外检标本共 100 例,其中肝组织 16 例,脑组织 13 例,甲状腺组织 45 例,淋巴结组织 26 例。所用器材: 樱花脱水机,LeicaRM2235 型切片机,中国亚都牌 SC-EB35B 型超声波加湿器,羽毛 A35 型刀片,塑料软管一段,塑料载玻片盒盖 1 个。

  1. 2 方法

  1. 2. 1 标本处理 100 例标本均经过 4% 中性甲醛固定,在樱花脱水机中经过梯度乙醇脱水、二甲苯透明、石蜡浸泡、常规包埋。共制作蜡块 530 块,其中甲状腺组织 174 块,肝组织 105 块,脑组织 43 块,淋巴结组织 208 块。

  1. 2. 2 蜡块切片及标本分组 530 块蜡块均使用同一台切片机,切片厚度 3 μm; 每一蜡块切片 2 次,第 1 次切片时采用加湿套装进行加湿处理,该组切片为加湿组; 第 2 次切片时不作任何处理,该组切片为对照组。整个操作过程中,均由经验丰富的同一技师操作。

  1. 2. 3 加湿器组 加湿器组在切片同时,采用超声波加湿器配合切片机加湿套装在切片过程中从始至终对蜡块进行加湿; 而对照组直接切片。

  1. 2. 4 切片机加湿套装制作及使用方法 将塑料载玻片盒盖较短的一侧去掉( 图 1) ,将塑料软管的一头插入加湿器出气孔中,另一头放置在切片机刀头的正上方( 图 2) ,将制作好的盒盖覆盖在软管头上( 图 3) ,在 23 ~ 25℃的室温下,加满加湿器水箱,打开开关,调节加湿器喷雾量旋钮使加湿器喷出的水雾完全覆盖所要切的蜡块,即可进行切片( 图 4) .

  1. 3 结果判定 参照 HE 切片的规范技术标准[3]判定为合格。①切片组织完整; ②切片薄厚均匀; ③切片染色对比清晰,红、蓝分明; ④切片无刀痕、无裂隙、无颤痕; ⑤切片平坦、无皱褶、无折叠; ⑥切片无污染; ⑦切片封胶适中,无气泡、透明度好; ⑧切片无松散,裱贴位置适当; ⑨切片整洁,标签端正牢固; 瑏瑠切片编号清楚,扫描准确。

  2 结果

  共切片 1060 片,其中加湿器组耗时 177 min,对照组耗时 243 min,制片时间较对照组减少 27. 1%; 加湿器组干燥、碎裂现象较对照组大幅减少( 79. 1%) .加湿器组共有 62 张蜡片出现干燥、碎裂( 11. 7%) ,其中甲状腺组织 20 片,肝组织 11 片,脑组织 6 片,淋巴结组织 25 片; 对照组有 297 张蜡片出现干燥、碎裂( 56%) ,其中甲状腺组织 97 片,肝组织 59片,脑组织 24 片,淋巴结组织 117 片。加湿器组 62 张出现碎裂的蜡片中,58 张在对照组中全部出现干燥碎裂,仅有 4张未出现; 对照组中出现干燥、碎裂的蜡片 239 张。由此可见,经过加湿器加湿后,甲状腺组织、肝组织、脑组织、淋巴结组织出现干燥碎裂的情况大大减少,切片平整,结构完好,各种组织的情况较对照组的有明显改善( 图 5,6) .

  3 讨论

  由于取材组织大小不等、组织来源各异、各自含水量和脂质成分不一,又经过相同的脱水、浸蜡后组织性状发生改变,导致切片干燥、碎裂。在脱水过程中,一些含水分较多的组织( 如大脑、甲状腺、淋巴结、肝等) 由于水分被置换出去制成的蜡块发干,易导致切片干燥、碎裂,这就影响了切片的质量,给病理诊断造成困难[4].我科技术人员通过反复试验,自 2013 年使用自制的加湿装置以来,使工作效率和切片质量都得到了大幅度提升。本研究结果显示,加湿器组出现干燥、碎裂的蜡片数量较对照组明显减少,同时耗时减少27. 1% ,在大规模应用时可有效减少工作时间,对于提升切片质量及缩短切片时间方面作用明显。此外,加湿组仅有11. 7% 的切片出现干燥碎裂现象,而对照组有 56% 的切片出现干燥、碎裂现象,可见加湿器组明显改善了切片质量。

  本组实验中,共有 58 个蜡块在两组中均出现干燥碎裂现象,推测原因: ①细胞内含水分比例较大的组织。经过同时脱水水分丢失过多,导致蜡片干燥、碎裂; 对此种情况可以通过加大加湿器的喷雾量来尽量减少脱水,但很难杜绝。②少部分肿瘤含胶原成分过多或钙盐沉积较为严重导致切片干燥、碎裂,这种情况通过勤换刀片和对钙盐沉积组织进行脱钙处理。而仅在加湿器组出现干燥碎裂的 4 个蜡块,考虑可能原因为切片例数较多,导致刀片变钝引起。而仅在对照组出现干燥、碎裂的蜡片为 239 张,主要原因为湿度不够,由于脱水过程中组织内的水分大部分被置换出去,导致组织内含水量不足、不均所致。

  我科自使用加湿器及切片加湿套装后,积累了一些使用经验: ①超声波加湿器在使用中,应尽量采用蒸馏水,以避免水垢影响切片机的寿命,也给保养带来困难。②在一段时间不使用加湿器时,应注意更换水箱中的陈水,将水箱及水槽清洗干净。③超声波加湿器有风动装置,具备进风口和出风口,长时间使用进风口处也会有尘埃堵塞,引起进风不畅,直接影响水雾扩散,应定时清理机器风口。④使用加湿器时应调节至合适的雾化量,过于潮湿会使切片机金属部件生锈,缩短切片机的寿命。⑤由于切片加湿套装的塑料软管较长,会有凝结的蒸馏水滞留在软管内,导致软管堵塞,故应经常倾倒软管内凝结的蒸馏水。

  参考文献:

  [1] 朱莉艳。 石蜡切片龟裂的原因分析[J]. 浙江中西医结合杂志,2008,18( 10) : 634 -635.

  [2] 付先利,吴建农。 一种解决切片干燥的方法[J]. 临床与实验病理学杂志,2013,29( 7) : 807.

  [3] 王德田,董建强。 实用现代病理学技术[M]. 北京: 中国协和医科大学出版社,2012. 76.

  [4] 王伯沄,李玉松,黄高升,等。 病理学技术[M]. 北京: 人民卫生出版社,2000: 75 -76.

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