改良Carazzi苏木精染色在冷冻切片染色中的运用

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  在快速病理诊断的过程中,冷冻切片制备的质量和速度决定了诊断的准确性和及时性,这就要求病理技术人员掌握熟练的切片技术及快速良好的染色方法。为了做到在更短的时间内染出优质的切片,我们改进了 Carazzi 苏木精染液,将整个冷冻切片染色时间从7 ~8 min 缩短为3 ~4 min[1],以下加以介绍。

  1 材料与方法

  1. 1 材料 选取大理学院昆明附属医院 2013-06—2014-03间术中快速冷冻组织标本 700 余例,分别为子宫肌瘤、甲状腺、乳腺、肺等组织,未固定新鲜取材,大小 1. 5 cm × 1 cm ×0. 4 cm,CRYOTOME FE 冷冻切片机切片,甲醇-冰醋酸固定,改良 Carazzi 苏木精及 1%水溶性伊红染色。

  1. 2 方法

  1. 2. 1 染液配制 ①2 g 无水苏木精溶于 10 ml 无水乙醇,加甘油至 100 ml,充分混合; ②23. 01 g 硫酸铝钾溶解在390 ml蒸馏水中; ③0. 2 g 碘酸钠溶解在 10 ml 蒸馏水中; 然后将①、②液充分混合后加入③液中,充分混匀后放置片刻即可使用。

  1. 2. 2 染色流程 ①组织切片 4 ~ 8 μm 厚,贴附于已编号的载玻片上; ②立即于甲醇-冰醋酸中固定 30 ~40 s,流水稍洗; ③改良 Carazzi 苏木精染色 50 s ~ 1 min; ④流水稍洗; ⑤1% 碳酸锂 15 s; ⑥流水稍洗; ⑦1% 水溶性伊红染 15 s; ⑧流水稍洗; ⑨梯度乙醇脱水、二甲苯透明及中性树胶封固; ⑩贴附标签。

  2 结果

  细胞核蓝色,细胞质、甲状腺胶质、胶原纤维、红细胞等呈不同深浅的红色。细胞核内染色质细致、清晰,核浆分明( 图 1 ~4)。
论文摘要

  3 讨论

  Carazzi 及改良 Carazzi 苏木精染色均属于进行性染色[2]。为了能够使细胞核更快速的着色而又无需加热苏木精,故在原法的基础上苏木精的量增加了 1 倍[3],改良后细胞核染色时间常温下只需50 s ~1 min 即可良好着色,室温降低时可适当延长染色时间或加温染色,并且无需盐酸-乙醇分化,从而缩短了染色时间。为了快速完全溶解苏木精,改用少许无水乙醇进行溶解。苏木精加入无水乙醇后放入热水浴箱内加热溶解( 不可直接酒精灯加热溶解) ,再加甘油。

  改良方法中使用无水乙醇还有一定的抑制真菌生长的作用,甘油则可防止苏木精染液过度氧化,减少挥发。氧化剂将原法中的碘酸钾改为碘酸钠,主要是碘酸钠在常温下易溶于水,无需加热,稳定性好。染液中碘酸钠的量是苏木精氧化所需量的一半,作用是先使一部分苏木精氧化成苏木红,另一部分未氧化的苏木精在染色过程中慢慢氧化为苏木红,延长染液的使用时间[4]。

  在配制各类型苏木精染液中媒染剂最常用的是二价或三价的金属盐( 如硫酸铝钾) ,但用量都不相同,甚至相差很大。理论上,苏木精被氧化成酸性染料苏木红后,仍不具有染色力,需与媒染剂结合,形成带正电荷的蓝色色淀才能与细胞核结合而完成染色。原法中 25 g 硫酸铝钾在 400 ml 蒸馏水中需加热才能完全溶解[2],但随着时间推移和/或温度降低会有结晶析出及沉淀产生。有学者认为,Carazzi 苏木精染液中媒染剂用量已经超出 1 g 苏木精所结合的量[5],其作用的只是铝离子,铝离子易水解成胶状氢氧化铝,过量时染液中常出现沉淀。本文对改良苏木精染液中使用了全量媒染剂及改良媒染剂进行对比染色,染色效果基本一致,所以将其调整至硫酸铝钾在水中溶解的饱和度[5],这样既可节省硫酸铝钾的用量且无需加热就能溶解,气温下降和染液时间推移均不会析出结晶及沉淀。

  改良 Carazzi 苏木精染液与 Carazzi 苏木精染液、Harris 苏木精染液、Gill 苏木精染液及 Lillie-Mayer 苏木精染液在冷冻切片染色效果中对比,改良苏木精染液着色只需要50 ~60 s,染色时间较短、细胞核内染色质更加细致、清晰,而实验中Gill 苏木精染液需要 3 ~ 5 min,余 3 种苏木精染液着色也需> 2 min。

  本改良法有以下优点: ①在冷冻切片中对细胞核着色快且无需加热、分化,有助于提高染色强度; ②氧化膜出现的速度比较慢; ③不出现结晶及沉淀; ④配制简单、省时,减少了在染液配制过程中的复杂性,还有无需加热、安全可靠、即配即用等优点。

  参考文献:

  [1] 中华医学会. 临床技术操作规范 病理学分册[M]. 北京: 人民军医出版社,2004. 38.

  [2] 杜卓民. 实用组织学技术[M]. 第二版. 北京: 人民卫生出版社,1998. 48.

  [3] Bancroft JD,Gamble M. Theory and practice of histologicaltechniques[M]. Fifth Eeition. UK: Church 111 Living stone.2001. 128 - 131.

  [4] 周建中. Carazzi 苏木素复染液的进一步改良[J]. 中国临床实用医学,2007,1( 11) : 70 -71.[5] 郑 伟. 苏木素染液中媒染剂用量的探讨[J]. 解剖学杂志,2006,29( 1) : 21,29.

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